III Международный конкурс
научно-исследовательских и творческих работ учащихся
«СТАРТ В НАУКЕ»
 
     

ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ПРЕПАРАТОВ «СУППОЗИТОРИИ С ХЛОРГЕКСИДИНА БИГЛЮКОНАТОМ 16 МГ» И ГЕКСИКОН® НА ПОКАЗАТЕЛИ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ
Коростелёв С.М.
Автор работы награжден дипломом победителя второй степени
Диплом школьника      Диплом руководителя
Текст научной работы размещён без изображений и формул.
Полная версия научной работы доступна в формате PDF


В настоящее время ассортимент лекарственных средств, содержащих антисептики для местного применения с целью лечения гинеколоических заболеваний, не так уж и велик. Ввиду этого появление в «арсенале» гинекологов, акушеров и венерологов каждого нового перспективного препарата может способствовать улучшению ситуации на «фронтах» борьбы с воспалительными гинекологическими заболеваниями. В клинической практике накоплен значительный позитивный опыт применения раствора хлоргексидина биглюконата в качестве антисептика с антимикробной активностью. Это уникальный препарат в форме вагинальных суппозиториев, содержащий хлоргексидина биглюконат, не имеющий аналогов на российском фармацевтическом рынке по сочетанию активного вещества и лекарственной формы. В связи с этим для расширения объёма производства лекарственных средств, содержащих хлоргексидин, ОАО «Биохимик» г. Саранск разработана технология суппозиториев с хлоргексидином на полиэтиленоксидной основе.

Вагинальные свечи - это лекарственная форма препаратов для введения во влагалище, которая используется для воздействия лекарственных веществ непосредственно на слизистую оболочку влагалища и шейки матки. Вагинальные свечи имеют небольшой размер, торпедообразную форму, гладкие края и ровную поверхность. Эти качества позволяют женщине легко и безболезненно ввести свечу. Гексикон оказывает губительное действие на грамположительных, грамотрицательных бактерий, а также возбудителей некоторых венерических болезней (трепонем, гонококков, трихомонад, хламидий) [3, с.48]. Выявлено, что композитные соединения гексикона – полиэтиленоксиды повышают антимикробную активность антисептика, а их совокупное действие обеспечивает наилучший фунгицидный эффект [4, с.255-257]. В отличие от растворов хлоргексидина свечи «Гексикон» позволяют женщине самостоятельно провести качественную обработку влагалища, не обращаясь за помощью в медицинское учреждение. Применение гексикона обеспечивает высокую концентрацию антимикробного вещества непосредственно в очаге инфекции. Необходимая антимикробная активность хлоргексидина биглюконата сохраняется в присутствии крови, что позволяет применять данный препарат даже во время менструации.

Необходимо отметить, что преимуществами локальной терапии гинекологических заболеваний являются: минимальный риск побочного действия, простота и удобство применения, возможность использования у больных с экстрагенитальной патологией, особенно если речь идёт о локализованных формах инфекционного процесса: острые вульвиты, вагиниты и цервититы или обострения хронических процессов во влагалище и шейке матки [6, с.5. Препарат можно применять беременным женщинам на различных сроках, так как он не содержит антибактериальных средств, а является эффективным антисептиком [6, с.5]. Комплексная терапия с использованием суппозиториев «Гексикон» оказывает выраженный эффект в отношении восстановления количественного соотношения микробных ассоциатов. Проведение медикаментозного лечения препаратом гексикон, содержащим активное вещество хлоргексидина биглюконат, у беременных с внутриутробной инфекцией и поздним гестозом позволяет достоверно снизить частоту развития позднего гестоза и таких осложнений, как несвоевременное отхождение околоплодных вод, хроническая фетоплацентарная недостаточность, преждевременное старение плаценты, послеродовые воспалительные заболевания у матери и новорожденного [3, с.48].

Гексикон считается уникальным препаратом не только для местного лечения инфекций женской половой сферы, но также и для экстренной профилактики инфекций, передаваемых половым путём (ИППП).

Цель

Целью работы явилось изучение влияния препаратов «суппозитории с хлоргексидина биглюконатом 16 мг» ОАО «Биохимик» г. Саранск и зарегистрированного аналога гексикон® компании «Нижфарм», Нижний Новгород, Россия на показатели периферической крови.

Задачи

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

- рассчитать терапевтическую дозу для животного (крысы-самки);

- рассчитать и экспериментально установить максимально допустимое количество суппозиторной массы при однократном введении гексикона® и суппозиториев с хлоргексидином;

- приготовить мазки крови;

- провести клинические анализы крови по общепринятым методикам;

-изучить в сравнительном аспекте влияние препаратов на показатели периферической крови.

Материалы и методы

Для лечения препарат Гексикон® применяют интравагинально по 1 суппозиторию 2 раза в сутки в течение 7-10 дней [2, с.24], что соответствует дозе 0,46 мг/кг (в пересчёте на действующее вещество хлоргексидина биглюконат). Масса одного суппозитория препарата «суппозитории с хлоргексидином» и гексикон® составляет 2,5 г и 3,0 г соответственно. В связи с чем, суточная доза препаратов при пересчёте на суппозиторную массу для крысы равна 421,44 мг/кг и 505,71 мг/кг соответственно. При проведении эксперимента дозы округлены до 0,42 г/кг и 0,50 г/кг соответственно. Максимально допустимое количество суппозиторной массы при однократном введении гексикона® и суппозиториев с хлоргексидином превышает объем терапевтической дозы в 4 раза. Поэтому для изучения возможного повреждающего действия препаратов гексикон® и «суппозитории с хлоргексидином» терапевтическая доза увеличена в 4 раза и составляет 10,8 мг/кг (в пересчёте на суппозиторную массу – 2,0 г/кг и 1,68 г/кг соответственно).

Для проведения опыта было использовано 5 групп животных по 10 крыс-самок в каждой группе. Животные 1-й группы служили контролем, они не получали изучаемые препараты, но находились в тех же условиях, что и животные опытных групп на протяжении всего эксперимента. Животные 2-й и 3-й групп получали суппозитории с хлоргексидином 16 мг в дозе 2,7 мг/кг (в пересчёте на суппозиторную массу 0,42 г/кг) и 10,8 мг/кг (в пересчёте на суппозиторную массу 1,68 г/кг) соответственно. Крысы 4-й и 5-й опытных групп получали препарат сравнения – гексикон® в дозах 2,7 мг/кг (0,5 г/кг) и 10,8 мг/кг (2,0 г/кг) соответственно.

Данное исследование выполнено на аутбредных крысах –самках Wistar весом 230-250 г. Во время эксперимента животные содержались в контролируемых условиях: температура окружающего воздуха 22±2˚С, относительная влажность 65±5%. Для размещения животных применялись макролоновые клетки Т-3 оборудованные стальными решетчатыми крышками, с кормовым углублением. В качестве подстилочного материала применялись древесные опилки нехвойных пород древесины. Животные содержались на стандартном пищевом рационе со свободным доступом к корму (Полнорационный комбикорм рецепт ПК-120 для содержания лабораторных животных, ГОСТ Р 50258-92, производитель ООО «Лабораторкорм») и воде. Вода водопроводная подавалась в стандартных питьевых бутылочках. Подстил, клетки и аксессуары, поилки для питья, менялись еженедельно.

Препарат «суппозитории с хлоргексидина биглюконатом 16 мг» (в дальнейшем именуемый суппозитории с хоргексидином) производства ОАО «Биохимик».

Состав:

активное вещество – хлоргексидина биглюконат 0,016 г;

состав основы на один суппозиторий:

  • Полиэтиленоксид-1500 2,299 г

  • Полиэтиленоксид-400 0,121 г

Описание: суппозитории слегка желтоватого цвета торпедообразной формы.

Препарат сравнения (аналог) «Гексикон®-суппозитории вагинальные 16 мг» (в дальнейшем именуемый гексикон) компании ОАО НИЖФАРМ®, Нижний Новгород, Россия.

Состав:

один суппозиторий содержит 0,016 г хлоргексидина биглюконата, полиэтиленоксидной основы (полиэтиленоксида -1500, полиэтиленоксида - 400) – достаточное количество до получения суппозитория массой от 2,94 до 3,25 г.

Описание

Суппозитории белого цвета или белого с желтоватым оттенком цвета, торпедообразной формы, допускается мраморность поверхности.

Исследуемые препараты вводились интравагинально ежедневно утром в одно и тоже время. Продолжительность эксперимента составила 30 дней.

При забое готовили мазки крови, собранную кровь смешивали с 6% раствором трилона Б для дальнейших клинических и биохимических исследований. Клинические анализы крови проводили по общепринятым методикам [5, с.54-56]. В камере Горяева подсчитывали количество эритроцитов, лейкоцитов, СОЭ (скорость оседания эритроцитов) определяли методом Панченкова, содержание в крови гемоглобина (Hb) – гемоглобинцианидным методом. В мазках подсчитывали состав лейкограммы и число тромбоцитов. По Тодорову и Идельсону определяли гематокрит и осмотическую резистентность эритроцитов. Количество ретикулоцитов определяли методом суправитальной окраски.

Результаты и их обсуждение

Глава 1. Влияние препаратов «суппозитории с хлоргексидина биглюконатом 16 мг» и гексикон® на показатели периферической крови

Применение в течение 30 дней суппозиториев с хлоргексидином и препарата сравнения гексикон во всех исследуемых дозах не выявило изменений в содержании гемоглобина, количестве эритроцитов, осмотической резистентности, скорости оседания эритроцитов и содержании тромбоцитов (таблица 1). В группах животных, получавших гексикон в дозе 2,7 мг/кг и 10,8 мг/кг и суппозитории с хлоргексидином в терапевтической дозе (2,7 мг/кг) отмечалось повышение значения гематокрита на 8%, 8% и 11% соответственно, но эти изменения были незначительны и не выходили за границы физиологической нормы для данных показателей. Содержание ретикулоцитов во всех опытных группах, также достоверно не отличалось от контрольных значений. Ретикулоциты (молодые эритроциты) формируются из нормобластов путем освобождения клетки от пикнотического ядра, задерживаются в костном мозге от 2 до 4 дней и, поступив в периферическую кровь, циркулируют, сохраняя базофильную субстанцию в течении суток.В норме ретикулоцитов содержится до 1% [1, с. 224], что наблюдалось и в наших экспериментальных сериях.

Таблица 1 - Показатели крови у крыс после длительного приема препаратов «суппозитории с хлоргексидином» и гексикон®

(M±m, n=10)

Показатели

Исследуемые группы (доза)

Контроль

Гексикон

(2,7 мг/кг)

Гексикон

(10,8 мг/кг)

Суппозитории

(2,7 мг/кг)

Суппозитории

(10,8мг/кг)

Эритроциты, 1012г/л

4,55±0,05

4,52±0,06

4,48±0,06

4,51±0,07

4,36±0,10

Ретикулоциты, %

0,68±0,04

0,59±0,16

0,69±0,10

0,69±0,06

0,90±0,18

Гематокрит, %

57,63±0,82

62,38±0,86*

62,25±0,80*

64,25±0,10*

57,13±2,18

Гемоглобин, г/л

131,6±0,86

131,7±1,73

131,2±1,80

132,9±1,55

129,5±2,47

СОЭ, мм/час

2,38±0,38

2,75±0,70

3,0±0,38

3,0±0,42

4,0±0,60

Осмотическая

резистентность, %

0,36±0,013

0,37±0,013

0,39±0,008

0,36±0,016

0,38±0,009

Тромбоциты, 109г/л

569,4±6,37

577,5±15,30

561,3±7,54

572,5±8,35

580,63±11,07

Примечания

1 *-достоверно по отношению к контрольной группе животных;

2 во всех остальных случаях Р>0,05;

3 Суппозитории - суппозитории с хлоргексидина биглюконатом 16 мг

Количество ретикулоцитов, как и наличие более молодых предшественников – нормоцитов, характеризуют интенсивность процессов эритропоэза. При гематологических исследованиях помимо количественных характеристик эритропоэза проводятся и морфологические исследования эритроцитов – изменение размеров, формы, интенсивности и характера окрашивания, появления патологических включений.

У животных контрольных и всех опытных групп отсутствует пойкилоцитоз, являющийся важнейшим признаком патологического изменения эритроцитов, развивается при сильно выраженных анемиях и носит весьма неблагоприятный характер. У самок встречаются единичные случаи присутствия в образцах мазков крови, как опытных, так и контрольных животных, полихроматофильных эритроцитов (эритроциты сероватого цвета), что является нормой и свидетельствует о некотором усилении эритропоэза, которое может быть вызвано периодически возникающими кровопотерями в результате функционирования менструального цикла. Нормоциты, и анизоциты в образцах мазков крови всех опытных животных отсутствовали.

Через 2 недели после отмены препаратов все исследуемые показатели достоверно не отличались от значений аналогичных характеристик контрольных животных таблица 2).

Таблица 2 - Показатели крови у крыс после отмены препаратов «суппозитории с хлоргексидином» и гексикон®(M±m, n=10)

Показатели

Исследуемые группы (доза)

Контроль

Гексикон

(2,7 мг/кг)

Гексикон

(10,8 мг/кг)

Суппозито-рии

(2,7 мг/кг)

Суппозито-рии

(10,8мг/кг)

Эритроциты, 1012г/л

4,55±0,05

4,48±0,05

3,88±0,72

4,46±0,05

4,32±1,02

Ретикулоциты, %

0,68±0,04

0,62±0,06

0,64±0,08

0,63±0,17

0,56±0,15

Гематокрит, %

57,63±0,82

59,8±1,07

55,0±2,17

61,4±1,60

58,61±1,08

Гемоглобин, г/л

131,6±0,86

133,2±1,34

132,5±1,37

134,6±1,43

133,8±1,51

СОЭ, мм/час

2,38±0,38

3,8±0,47

4,8±1,09

3,8±0,57

4,2±0,72

Осмотическая

резистентность, %

0,36±0,013

0,38±0,020

0,37±0,020

0,39±0,010

0,38±0,012

Тромбоциты, 109г/л

569,4±6,37

557,0±9,81

560,5±6,12

559,3±6,41

554,2±5,79

Примечания

1 во всех случаях Р>0,05;

2 Суппозитории - суппозитории с хлоргексидина биглюконатом 16 мг

Глава 2. Влияние препаратов «суппозитории с хлоргексидина биглюконатом 16 мг» и гексикон® на состав лейкоцитарной формулы

Изучение состава лейкоцитарной формулы после длительного введения исследуемого препарата и его фирменного аналога (30 дней) не выявило существенных нарушений (таблица 3). Общее количество лейкоцитов и соотношение основных компонентов лейкоцитограммы не отличалось от контрольных величин у крыс-самок при использовании препаратов в обеих дозах. В образцах мазков крови контрольных и опытных животных отсутствовали «молодые» предшественники лейкоцитов гранулоцитарного ростка – миелоциты, метамиелоциты («юные» нейтрофилы), не обнаруживались атипичные клетки лимфоцитов с измененной морфологией.

Таблица 33- Содержание лейкоцитов и лейкоцитарная формула у крыс после длительного применения препаратов «суппозитории с хлоргексидином» и гексикон®(M±m, n=10)

Показатели

Исследуемые животные (дозы)

Контроль

Гексикон

(2,7 мг/кг)

Гексикон

(10,8 мг/кг)

Суппозитории

(2,7 мг/кг)

Суппозитории

(10,8мг/кг)

Лейкоциты,

109 л

6,44±0,60

5,33±0,29

5,65±0,53

5,63±0,37

5,33±0,27

Эозинофилы, %

1,63±0,32

2,38±0,32

2,88±0,64

2,00±0,27

2,63±0,73

Базофилы, %

0

0

0

0

0

Нейтрофилы

юные, %

0

0

0

0

0

Нейтрофилы

палочкоядерные, %

3,13±0,52

2,13±0,30

2,63±0,26

2,13±0,40

2,13±0,35

Нейтрофилы

сегментоядерные, %

17,75±3,13

14,50±1,82

18,50±1,57

18,88±1,69

22,88±2,11

Лимфоциты, %

71,25±3,57

74,88±0,44

69,88±2,26

71,13±0,55

66,0±2,36

Моноциты, %

6,25±0,53

6,25±0,37

6,13±0,48

5,88±0,30

6,50±0,57

Плазмоциты, %

0

0

0

0

0

Миелоциты, %

0

0

0

0

0

Атипичные клетки, ед.

0

0

0

0

0

Примечания

1 во всех случаях Р>0,05;

2 Суппозитории - суппозитории с хлоргексидина биглюконатом 16 мг

Клинические исследования крови, проведенные через 2 недели после окончания введения животным препаратов «суппозитории с хлоргексидином» и гексикона, показали, что содержание лейкоцитов и все составляющие лейкоцитарной формулы не отличались у животных контрольной и всех опытных групп.

Таблица 4- Содержание лейкоцитов и лейкоцитарная формула у крыс

после отмены препаратов «суппозитории с хлоргексидином» и гексикон®(M±m, n=10)

Показатели

Исследуемые животные (дозы)

Контроль

Гексикон

(2,7 мг/кг)

Гексикон

(10,8 мг/кг)

Суппозитории

(2,7 мг/кг)

Суппозитории

(10,8 мг/кг)

Лейкоциты,

109 л

6,44±0,60

5,04±0,36

5,14±0,48

5,32±0,29

5,04±0,42

Эозинофилы, %

1,63±0,32

1,41±0,51

0,80±0,37

0,83±0,37

1,82±0,49

Базофилы, %

0

0

0

0

0

Нейтрофилы

юные, %

0

0

0

0

0

Нейтрофилы

палочкоядерные, %

3,13±0,52

1,40±0,81

2,20±0,37

2,82±0,37

1,80±0,47

Нейтрофилы

сегментоядерные,%

17,75±3,13

16,40±1,22

18,21±0,97

18,20±0,73

17,00±1,14

Лимфоциты, %

71,25±3,57

73,22±0,97

71,80±0,66

72,41±0,75

73,23±1,24

Моноциты, %

6,25±0,53

7,40±0,68

7,00±0,45

6,43±0,51

5,20±0,73

Плазмоциты, %

0

0

0

0

0

Миелоциты, %

0

0

0

0

0

Атипичные клетки, ед.

0

0

0

0

0

Примечания

1 во всех случаях Р>0,05;

2 Суппозитории - суппозитории с хлоргексидина биглюконатом 16 мг

Выводы

Таким образом, результаты клинического анализа не выявили, каких либо значительных, изменений в картине крови. По большинству показателей клинического анализа животные всех экспериментальных групп не отличались от контроля. Увеличение значения гематокрита отмечено в группах крыс-самок, принимавших гексикон® в обеих исследуемых дозах и суппозитории с хлоргексидином в терапевтической дозе. Выявленные незначительные отклонения отражают временные сдвиги и исчезают через две недели после отмены препаратов.

Список использованных источников

  1. Абрамов, М. Г. Гематологический атлас / М. Г. Абрамов - М.: Медицина, -1985. -344c. ил.

  2. Долгов, В.В. Лабораторная диагностика нарушений обмена белков / Долгов В.В., Шевченко О.П. – М.: Изд-во Триада, 2002. – 67 с.

  3. Каминский, В.В.,Ещенко, Е.Г., Зеленина М.В. Опыт применения препарата гексикон у беременных с бактериальным вагинозом с целью профилактики внутриутробного инфицирования плода [Электронный ресурс] Электрон. дан.- Серия: Медицина, 2005.- 1 электрон, опт. Диск (CD-ROM).- Загл. с экрана.

  4. Карпунина, Т.Н. Рационализация терапии смешанных кандидозно-бактериальных инфекций влвгалища / Т.И. Карпунина, Т.Н. Коломойцева, Ю.А. Захарова// Актуальные вопросы вакцинно-сывороточного дела в XXI веке: материалы Всерос. науч.-практ. конф.- Пермь, 2003.-С. 255-257.

  5. Сандакова, Е.А. Оценка эффективности и безопасности применения препарата «Гексикон» в терапии различных форм вагинального кандидоза/ Е.А. Сандакова, Т.И. Карпунина, Т.Н. Коломойцева// Гинекология.- 2004.-Т.6, №2.- С. 54-56.

  6. Сироштан, А. Гексикон от компании «Нижфарм»: когда женщина нуждается в защите/ А.Сироштан/ Аптека.- 2004.-№32 (453).-23 августа.-С.5.