XXVI Международный конкурс научно-исследовательских и творческих работ учащихся

Старт в науке

Оценка биологической активности почв пойменных дубрав в окрестностях города Пензы

• Авторы
• Руководители
• Файлы работы
• Наградные документы

Илюхина А.А. 1

---

1МБОУ СОШ№71 город Пенза

Суркова О.Е. 1

---

1МБОУ СОШ№71 город Пенза

Работа в формате PDF

742.2 KB

Автор работы награжден дипломом победителя I степени

Диплом школьникаСвидетельство руководителя

ВВЕДЕНИЕ

Почвенная микробиота, характеризуясь чрезвычайным разнообразием, является одним из основных компонентов окружающей среды и выполняет важные экологические функции. Она определяет уровень почвенного плодородия, способность самоочищения почвы, фитосанитарную защиту. Почвенная микробиота не только изменяет состав и свойства почвы, но и сама напрямую зависит от меняющихся условий обитания, возникающих, в том числе, и под влиянием техногенных воздействий. Динамика микробиологических процессов в почвах определяется не столько численностью микроорганизмов, сколько их активностью [2]. Такая активность почв позволяет определить интенсивность воздействия человека на почвенный покров. Это дает возможность оценить негативные процессы, происходящие при вмешательстве человека, и предотвратить снижение плодородия почв.

Поэтому, в последнее время практическое значение почвенной микробиоты сильно возросло. Активность почвенной биоты может быть индикатором экологического состояния почв.

Проведено сравнительное изучение азотфиксирующей активности почв на примере участков с различной степенью транспортной нагрузки. Учитывалась степень удаленности исследуемых территорий от крупнейших транспортных магистралей (федеральная трасса М5) до проселочных дорог с малой интенсивностью движения.

В связи с этим актуальным является изучение микробиологического состояния почв в условиях интенсивного антропогенного воздействия [1, 17].

Поэтому цель работы: оценить биологическую активность почв пойменных дубрав в окрестностях города Пензы

Задачи:

1. Используя литературные источники, разработать план исследования;

2. Отобрать необходимые приемлемые методики для проведения исследования;

3. Собрать образцы почв с исследуемых территорий;

4. Определить свойства исследуемых почв, провести биотестирование почв, проанализировать полученные результаты;

5. Выяснить как влияют особенности почв пойменных дубрав на биологическую активность азотофиксирующих бактерий;

6. Оценить возможность использования азотофиксирующих бактерий в качестве биоиндикаторов состояния почв города.

Объект исследования: азотофиксирующие бактерии.

Предмет исследования: биологическая активность азотофиксирующих бактерий в почвах пойменных дубрав

Дефицит питательных элементов, засоление почв, наличие тяжелых металлов, ограниченная влажность и сочетание всех вышеперечисленных неблагоприятных условий может приводить к исчезновению популяции азотфиксаторов и изменению микробиоценоза почвы.

Гипотеза: чем выше заселенность почвы азотобактером, тем менее деградирована почва [2], то есть обилие этих бактерий оценивалось как положительное экологическое свойство почвы [3].

ГЛАВА 1. ОСОБЕННОСТИ АЗОТФИКСИРУЮЩИХ БАКТЕРИИ РОДА AZOTOBACTER (обзор литературы)

1.1 Характеристика бактерий рода Azotobacter

Azotobacter – род бактерий, живущих в почве и способных в результате процесса азотфиксации переводить газообразный азот в растворимую форму, доступную для усваивания растениями [16].

Azotobacter — это род свободноживущих грамотрицательных бактерий, обитающих в почве. Azotobacter chroococcum был впервые выделен в чистой культуре голландским ученым М. Бейеринком в1901 г.

Это аэробные, свободноживущие почвенные микробы, которые играют важную роль в азотном цикле в природе, связывая атмосферный азот, недоступный растениям, и выделяя его в виде ионов аммония в почву (азотфиксация). Помимо того, что он является модельным организмом для изучения диазотрофов, он используется людьми для производства биоудобрений, пищевых добавок и некоторых биополимеров.

Представители рода Azotobacter чаще всего обитают в нейтральных и слабощелочных почвах, а также в пресноводных водоемах и солоноватоводных болотах. Однако, некоторые представители Azotobacter были обнаружены и в экстремальных условиях: в почвах северного и южного полярного и антарктического региона. Azotobacter нередко образуют симбиотическую связь с растениями и живут в ризосфере – узком слое почвы, прилегающем к корням растения толщиной около2-5 мм. Представители данного рода получают энергию в ходе окислительно-восстановительных реакций, используя углеводы, спирты и соли органических кислот. Азотфиксаторы способны фиксировать по крайней мере 10 микрограмм азота на один грамм потреблённой глюкозы.

Дефицит питательных элементов, засоление почв, наличие тяжелых металлов, биоциды, ограниченная влажность и сочетание всех вышеперечисленных неблагоприятных условий может приводить к исчезновению популяции азотфиксаторов и изменению микробиоценоза почвы.

Азотобактер требователен к субстрату и особенно реагирует на дефицит фосфора. На бедных почвах он не развивается. В связи с этим его используют в качестве индикатора на содержание в почве фосфора и калия. Азотобактер плохо развивается в кислой среде, растет при рН 5,5 - 7,8 и более влаголюбив, чем другие микроорганизмы почвы. Азотобактер широко распространен в почвах разных географических широт. В целинных почвах азотобактер встречается редко, и по мере их окультуривания, создания необходимых условий численность его возрастает. Положительное действие азотобактера на растения объясняется тем, что он выделяет в окружающую среду витамины и другие биологически активные вещества: никотиновую и пантотеновую кислоты, гиббереллин, гетероауксин [5].

Источник азота для них - соли аммония, нитриты, нитраты и аминокислоты. При отсутствии связанных форм азота азотобактер фиксирует молекулярный азот. Небольшие дозы азотсодержащих соединений не приводят к депрессии фиксации азота, а иногда даже стимулируют её. Увеличение дозы связанного азота в среде полностью подавляет усвоение молекулярного азота.

Из описанных видов азотобактера наиболее изучены A. chroococcum, A. beigerinckii, A. vinelandii и A. paspali. Перечисленные виды различаются по размерам и форме клетки, а также по некоторым другим признакам, в частности пигментации колоний. Так, колонии A. chroococcum имеют бурый, почти черный цвет, A. vinelandii выделяют желтый пигмент зеленой флуоресценции, A. paspali так же продуцируют желтый пигмент. В почве чаще всего встречается A. chroococcum.

Для бактерий рода Azotobacter характерны относительно крупные клетки овальной формы, диаметром 1,0–2,0 мкм, плеоморфные, от палочковидных до коккoвидных. Могут располагаются одиночно, парами или группaми неправильной формы, иногда в виде цепочек разной длины. Эндоспор не образуют, но формируют цисты [14].

1.2 Влияние факторов внешней среды на активность азотобактера

Значение рН среды. Азотобактер чрезвычайно требователен к реакции среды. Бактерии этого рода тяготеют к нейтральным почвам и плохо переносят подкисление [6, 11, 12, 16].

Повышенная кислотность и щелочность отрицательно сказывается на интенсивности потребления энергетического материала и продуктивности азотфиксации. Физиологические и биохимические процессы протекают весьма неравномерно: чрезвычайно слабо в сильнокислой среде (рН 5,05-5,29), удовлетворительно в слабокислой и сильнощелочной (рН 5,8 и 9,12), относительно хорошо при рН 8,05-8,29 и наиболее интенсивно при 7,2-7,4 [1, 6, 12].

Уровень аэрации. Данный микроорганизм является аэробом. Аэрация способствует размножению азотобактера [11]. Вместе с тем установлено, что азотобактер может размножаться и в микроаэрофильных условиях. При слишком высоком уровне аэрации может наблюдаться уменьшение накопления биомассы.

Влажность. Азотобактер предъявляет высокие требования к влажности почвы [11, 12]. Глубина проникновения азотобактера в почву также определяется в значительной степени обеспеченностью почвы влагой [6, 12].

Температура. В отношении температуры азотобактер является типичным мезофилом с оптимумом в 25°-30°С [6, 12]. Положение оптимальной температурной точки развития может несколько меняться в зависимости от состава и рН среды.

Минеральный состав почвы. Большое влияние на развитие азотобактера в почве и азотфиксацию оказывает минеральный состав почвы.

Отличительной особенностью бактерий рода Azotobacter является их высокая требовательность к наличию в среде микроэлементов. Совершенно необходим для большинства культур молибден, так как он играет ключевую роль в усвоении молекулярного азота [11].

Азотобактер достаточно требователен к условиям среды обитания, что может быть использовано для индикации агрономических качеств почв. Согласно наблюдениям свободноживущий азотфиксирующий Azotobacter chroococcum чрезвычайно чувствителен к токсичным веществам, накапливающимся в почве.

Биологические факторы. Из биологических факторов, влияющих в почве на физиологическое состояние азотобактера, следует, прежде всего, отметить почвенные микроорганизмы и растения. Они могут влиять на жизнеспособность азотобактера в почве косвенным путем, изменяя рН, окислительно-восстановительные условия и непосредственно, вырабатывая питательные и биологически активные вещества.

Отмечено активирующее влияние целлюлозоразрушающих, маслянокислых и других почвенных микроорганизмов [11, 12]. Большинство актиномицетов стимулировало развитие азотобактера [6].

Было установлено, что азотобактер способен вырабатывать фунгистатическое вещество, относящееся к группе анисомицина [3, 11]. Культура Azotobacter chroococcum способна продуцировать противогрибковый полиеновый антибиотик aзохроомицин, активный против значительного числа фитопатогенных грибов [4].

1.3 Взаимодействие бактерий рода Azotobacter с высшими растениями

Развитие азотобактера прoисходит в зоне корня растений и предполагает улучшение азотного питания в почве, особенно при стимулировании размножения азoтобактера. При некоторых условиях среды бактерии рода Azotobacter улучшают рост растения. Полoжительный результат можно объяснить способностью синтезировать биологически активные вещества, стимулирующие ферментативные процессы в корне и стимулировать начальные этапы синтеза азотсодержащих органических соединений, ускоряющих прорастание семян [7].

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Характеристика территорий исследования

Исследования проводились с июня по ноябрь 2024 года. Образцы почв были собраны в июне - июле 2024 года, определение свойств образцов почв и наличия в них бактерий рода Azotobacter осуществлялся в сентябре-ноябре 2024 года. Сбор образцов произведен с трех территорий города Пензы в пределах пойменных дубрав.

Первый район исследования (участок №1) расположен на территории городских лесов в юго-восточной части города Пензы на землях лесного фонда ООПТ «Присурская пойменная дубрава» располагается в 25 км от федеральной трассы М5, отличается возвышенным рельефом. Это уникальный природный объект, на территории которого находятся хорошо сохранившиеся ценные дубовые насаждения с разновозрастной структурой с примесью сосны обыкновенной, липы мелколиственной.

Второй район исследования (участок №2) расположен на территории городских лесов в восточной части города Пензы в долине стариц реки Суры на расстоянии 50 метров от дорог муниципального значения, отличается выровненным низменным рельефом, также представлен поименной дубравой с примесью липы мелколиственной.

Третий район исследования (участок №3) расположен на территории городских лесов в северной части города Пензы в долине реки Суры на расстоянии 200 метров от федеральной трассы М5, отличается выровненным низменным рельефом, также представлен поименной дубравой с примесью вяза голого, липы мелколиственной, ясеня обыкновенного, клена татарского.

Районы исследования пронизаны густой сетью троп и грунтовыми дорогами, следовательно отличаются высокой рекреационной нагрузкой. Под влиянием же повышенной рекреации увеличивается давление на почву, происходит нарушение естественного сложения, и верхняя часть почвенного профиля оказывается значительно плотнее нижележащего. При этом ухудшаются условия аэрации и развитие микроорганизмов ослабляется.

2.2. Характеристика материалов и методов исследования

Пробы почвы отбирали из поверхностных почвенных разрезов по общепринятой методике [6,8] из слоя 0-20 см. В каждом из указанных районов было выбрано 5 точек (в каждой точке отбирали по 3 образца почвы). Было исследовано по 15 образцов почв с каждой территории. При исследовании почвы с каждого участка отбирали смешанный образец почвы методом конверта.

Для изучения почвы в исследуемых районах, почва была высушена при комнатной температуре. После высушивания почву измельчили при помощи ступки до однородной массы, и просеяли через лабораторное сито для получения однородных образцов почвы.

Механический состав почв определяли методом шнура, для определения химического состава образцов использовали тест-комплект НИЛПА ПРО 10.

Особенности почвенного дыхания определяли абсорбционным методом (Шариков, 1984г.)

Определение степени экологического загрязнения почв проводилось биотестированием на проростках редиса в пятикратной повторности [6,8]. Предварительно навеску почв (5г) помещали на дно чашки Петри и равномерно распределяли по дну, закрывали субстрат бумажным фильтром и заливали 20 мл дистиллированной воды на сутки. После этого семена редиса помещали в чашки Петри по 12 штук и добавляли по 10 мл дистиллированной воды. Затем проводили измерения количества корней, длины главного корня и зоны боковых корней у проростков.

Для выявления микроорганизмов рода Azotobacter комочки просеянной и увлажненной почвы помещали на питательную среду Эшби [4], в пятикратной повторности. Развитие колоний происходило при комнатной температуре 22 °С.

Азотфиксирующую активность выявляли по числу колоний азотобактера, выращенного на пробах почвы с исследуемых участков [6,8]. Из увлажненной почвы формировали комочки диаметром 1-2 мм и размещали по 50 комочков в чашке Петри (в узлах трафарета). Чашки Петри с закрытыми крышками оставили при комнатной температуре на 10 дней. По истечении этого времени вокруг комочков появились обрастания. Наблюдение за ростом колоний проходило ежедневно, а сбор статистической информации на 4, 7 и 10 день согласно методике. Через 7 дней просматривают чашки и подсчитывают число колоний азотобактера на поверхности почвы.

Определение азотофиксирующих бактерий осуществлялось по окраске, которая зависит от содержания пигментов.

Математическую обработку и представление данных в виде диаграмм выполняли с применением программы Microsoft Excel 7,0.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3. 1. Комплексная характеристика почвенных образцов

Первым этапом данной работы стало определение механического состава образцов почвы и наличие в ней карбонатов. Затем определяли кислотность почв, наличие в образцах железа, меди, фосфатов, нитратов, нитритов, интенсивность дыхания в почвенных образцах (использовали абсорбционный метод по Шаркову 1984г.).

По механическому составу почвенные образцы отличаются. Участок №1 – почвы супесчаные, участок №2 – почвы легкосуглинистые, участок №3 – среднесуглинистые. Карбонаты не выявлены.

Активная кислотность (pH) является одной из наиболее важных характеристик при исследовании деградационных изменений почв урбанизированных территорий.

Кислотность почвенных образцов по почвенной вытяжке определялась с помощью прибора Алямовского. Кислотность на участке №1 - 5,5, на участке №2 – 5,5 и на участке №3 – 6,5 (табл. 2). Следовательно, на всех исследуемых территориях почвы кислые и только на участке №3 близки к нейтральным (рис. 2). По литературным данным кислотность серых лесных почв в Среднем Поволжье колеблется от 5,5 до 6,5, следовательно наши данные соответствуют данной характеристике и не предполагают каких-то экологических (антропогенных) нарушений.

По данным критериям только почва на участке №3 (пойменная дубрава вдоль федеральной трассы М%) больше соответствует условиям обитания бактерий рода Azotobacter.

Большое влияние на развитие азотобактера оказывает влажность почвы.

Почвенное дыхание отличается на исследуемых территориях (рис. 3). На участке №1 – 6,16 мг/100 г. почвы, на участке №2 – 6,60 мг/100 г, а на участке №3 – 0,88 мг/100 г почвы. Скорее всего, низкая интенсивность дыхания связана с избыточным увлажнение почв и достаточно близким расположением грунтовых вод на участках №2 и №3.

Следовательно, интенсивность окисления органического вещества почвенными микроорганизмами и корнями в 10 раз ниже на участке, примыкающем к федеральной трассе М5.

Таблица 1

Характеристика почвенных образцов по химическому составу

Перегной почвы азотобактером практически не используется. Поэтому в почвах, даже очень богатых перегноем, при отсутствии свежих органических остатков интенсивного размножения азотобактера не происходит. Однако, если в почве имеются органические вещества и продукты отмирания растительных и животных клеток, азотобактер развивается хорошо. Так как проективное покрытие травянистого покрова выше в пойменной дубраве рядом с федеральной трассой и в Засурской пойменной дубраве, то количество органического вещества в почвенных образцах здесь выше.

Развитие азотобактера и фиксация им азота в значительной степени зависят от наличия в почве фосфора и кальция. Выше содержание фосфора в образцах почвы на участках №№2,3. Кальций во всех образцах отсутствует (табл.2). Кальций необходим азотобактеру при питании как молекулярным, так и аммонийным азотом [6]. Микроэлементы (молибден, бор, ванадий, железо, марганец) необходимы азотобактеру в первую очередь для осуществления процесса азотофиксации, так как часто входят в состав ферментов, осуществляющих данный процесс. Выше содержание железа (табл.1) в образцах почвы пойменной дубравы в районе ГПЗ. Потребность в микроэлементах определяется в значительной степени геохимическими условиями существования азотобактера в почвах.

В отношении температуры азотобактер является типичным мезофильным организмом, с оптимумом развития около 25–30° С. Биоценоз микроорганизмов (включающих Azotobacter), формирующийся в условиях той или иной почвы, меняется в значительной степени под влиянием растительного покрова [4].

3. 2. Определение степени экологического загрязнения почв

Биотестирование образцов почвы проводилось с 11 по 17 ноября 2024 года.

Предварительно навеску почв (5г) помещали на дно чашки Петри и равномерно распределяли по дну, закрывали субстрат бумажным фильтром и заливали 20 мл дистиллированной воды на сутки. После этого семена редиса сорта «Чемпион» помещали в чашки Петри по 12 штук и добавляли по 10 мл дистиллированной воды. Затем проводили измерения количества корней, длины главного корня и зоны боковых корней у проростков.

Таблица 2

Результаты биотестирования почвенных образцов

По биотестированию было установлено, что условия для развития корней одинаковы на всех участках (табл.2), отличия характерны только для побегов, размер побегов в районе Засурской пойменной дубравы в 1,5 раза ниже, чем на других участках.

3. 3. Определение активности азотофиксирующих бактерий

Посев производился на среду Эшби. Среда Эшби, не содержащая минеральных или органических источников азота, является селективной средой для культивирования азотфиксаторов рода Azotobacter. Нами были получены колонии Azotobacter chroococcum, которые образуют колонии с бурым, почти чёрным пигментом.

Азотофиксирующую активность выявляли по числу колоний азотобактера, выращенного на пробах почвы с исследуемых участков. Срок культивирования Az. Chlorococcum на среде Эшби составляет десять дней, после чего осуществляется оценка на содержания азотобактера, в процентах обрастания. Через 4, 7, 10 дней просматривали чашки Петри и подсчитывали число колоний азотобактера на поверхности почвы и определяли процентное обрастание комочков почвы (табл. 1).

Количество колоний азотобактера по вариантам исследования представлено в таблице 4.

Таблица 3

Число колоний азотобактера с почв исследуемых территорий (в процентах обрастания)

Первые обрастания вокруг комочков появились на образцах почвы на третий день. На 7 день обрастания часть комочков приобрели коричневую окраску (табл. 3), а на 10 день количество обрастаний с бурым пигментом увеличилось (рис. 5).

На 10 день (табл. 3) наибольшее количество обрастаний было у комочков почвы на участке №3, а наименьшее у почвы на участке №1, также, как и на 7 день.

Пигментированность колоний соответствует адаптации бактерий к окружающей среде [3].

Исследования показали, что азотобактер присутствует во всех образцах почвы, но его количество не одинаково. Максимальное присутствие азотобактер проявил в пробах почвы, взятых с участков пойменного леса, расположенного вдоль федеральной трасы М5, наименьшая активность характерна для почвенных образцов, взятых в пределах ООПТ «Засурская почвенная дубрава»

По мнению Борисова А.Г. «стрессовые ситуации приводят к росту еолоний азотофиксирующих бактерий». Степень проявления активности азотобактера, очевидно, связана с целым комплексом природных и техногенных факторов. В целом антропогенное воздействие на почвы нарушает устойчивость экосистем, стимулируя этим повышенную активность азотобактера, проявляющуюся его переходом к азотфиксации [3]. Остальные авторы придерживаются противоположной точки зрения.

ВЫВОДЫ

1. Выявлен механический состав почвы. Определена кислотность (pH) почвенной среды. Определено содержание железа, нитратов, нитритов, меди, фосфатов.

2. В ходе работы было выявлено, что азотобактерии присутствуют во всех анализируемых образцах почвы, но количество и их активность не одинаковы. Установлено, что содержание азотофиксирующих бактерий значительно выше на среднесуглинистых почвах в среднекислой среде, по сравнению с супесчаной почвой в среднекислой среде.

3. Установлено, азотобактер требует для своего развития сочетания факторов, создающегося в почвах территорий; нейтральный рН, высокое содержание органического вещества, фосфора, калия. В кислых неокультуренных почвах, как известно, азотобактер встречается в малых количествах, что позволяет рассматривать эту бактерию как индикаторную на урбаногенез.

Гипотеза подтвердилась частично. Наиболее плодородными оказались почвы пойменной дубравы вдоль федеральной трассы М5.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Гипотеза подтвердилась не полностью. Для развития азотобактера требуется сочетание нескольких факторов одновременно, поэтому трудно установить зависимость между активностью азотобактора и степенью деградации почв. По мнению Борисова А.Г. «стрессовые ситуации приводят к росту колоний азотофиксирующих бактерий». Степень проявления активности азотобактера, очевидно, связана с целым комплексом природных и техногенных факторов. В целом антропогенное воздействие на почвы нарушает устойчивость экосистем, стимулируя этим повышенную активность азотобактера, проявляющуюся его переходом к азотфиксации [3]. Остальные авторы придерживаются противоположной точки зрения.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Артамонова, В.С. О состоянии почвенных азотофиксирующих бактерий на территории городского леса / В.С. Артамонова, Б.С. Бортникова // Вестник Перм. ун-та. – 2006. – № 2. – С. 150-157.

2. Башкинова, О.В. Изменение структуры микробных сообществ почв промышленного пригорода под влиянием комплексного антропогенного воздействия / О.В. Башкинова, И.Н. Волкова, О.Ю. Позднякова [и др.] // Проблемы агрохимии и экологии. – 2011. – № 3. – С. 58.

3. Борисова А. Г. Микробиологическая активность в почвах разного генезиса и техногенной трансформации. Вестник молодых ученых и специалистов Самарского государственного университета. 2013. № 2

4. О состоянии окружающей среды Республики Мордовия в 2015 году: гос. докл.– Саранск : Изд-во Мордов. ун-та, 2016. – С. 24–29.

5. Громов, Б.В. Экология бактерий / Б.В. Громов, Г.В. Павленко. – Л.: Изд-во ЛГУ, 1989. – 246 с.

6. Довлетярова, Э.А. Динамика численности основных групп микроорганизмов населения под насаждениями дубравы и сосны с березой в условиях различного антропогенного воздействия // Вестник РУДН. – 2006. – № 1. – С. 3.

7. Демаков Ю.П., Исаев А.В., Митякова И. И., Нуреев Н. Б. Границы и причины изменчивости параметров кислотности почв лесных биогеоценозов среднего Поволжья. Вестник ПГТУ. 2019. № 1 (41)

8. Доспехов, Б.А. Методика полевого опыта / Б.А. Доспехов. – М.: Агропромиздат, 1985. – С. 73–96.

9. Емцев, В.Т. Микробиология / В.Т. Емцев, Е.Н. Мишустин. – М.: Дрофа, 2005. – 445 с.

10. Жукова, Н.В. Химия окружающей среды: лабораторный практикум / Н.В. Жукова, О.В. Позднякова. – Саранск: Мордов. гос. пед. ин-т., 2015. – С. 47–51.

11. Комова, Г.Н. Некоторые аспекты микробиологической активности почв в условиях города / Г.Н. Комова, М.В. Лабутина // Актуальные проблемы науки в студенческих исследованиях (биология, экология, химия): III Всерос. студенч.науч-практ. конф. – Саранск, 2016. – С. 41–44.

12. Косолапова, А.В. Оценка изменений свойств почв под влиянием антропогенных факторов // Вестник Воронеж. пед. ун-та. – 2006. – № 5. – С. 5–6.

13. Круглов, Ю.В. Микробное сообщество почвы: физиологическое разнообразие и методы исследования // С/х биология. – 2016. – № 1. – С. 46–59.

14. Лабутина, М. В. Физиология растений: учеб. пособие / М.В. Лабутина, Т.А. Маскаева, Н.Д. Чегодаева. – Саранск: Мордов. гос. пед. инт, 2016. – С. 49–50.

15. Скугорева С. Г., Кутявина Т. И., Огородникова С. Ю., Кондакова Л. В., Симакова В. С., Блинова А. Л., Зыкова Ю. Н., Домрачева Л. И., Ашихмина Т.Я. Комплексный подход в оценке экологического состояния городских почв. Теоретическая и прикладная экология. 2019. № 3

16. Федотов, Г.Н. Микроорганизмы и образование гумусовых веществ в почвах / Г.Н. Федотов, Л.В. Лысак, В.С. Шалаев // Вестник Москов. гос. ун-та леса. – 2013. – № 7. – С. 87–91.

17. Агроэкология / под ред. В.А. Черникова, А.И. Чекереса. – М.: Колос, 2000. – 536 с.

ПРИЛОЖЕНИЯ

Приложение 1. Определение интенсивности дыхания, кислотности почв

Приложение 2. Проведение биотестирования

Приложение 3. Определение активности роста колоний азотофиксирующих бактерий